AAV/LVV為載體的眼用注射液的不溶性微粒檢查

腺病毒相關病毒（adeno-associated virus，AAV）是一類單鏈線狀DNA缺陷型病毒，有多種血清型，且不同血清型的AAV具有不同的組織器官靶向性。通過修飾、突變AAV的外殼蛋白序列產生新的組織傾向性的血清型。安全性高、可長期表達，治療效果持久，且易於純化，被視為最有前途的基因轉移載體之一，在世界範圍內的基因治療和疫苗研究中得到廣泛應用。全球已有多個基因治療產品上市。

慢病毒載體（Lentivirus, LV）是細胞和基因療法常用的遞送載體之一，它的主要功能是將目的基因轉移並整合到宿主細胞的基因組中，可以用來研究基因水平上的生物學調控機製。作為一種宿主範圍很廣的病毒載體，它們能夠轉導分裂和非分裂細胞，例如神經元、造血幹細胞和免疫細胞，尤其是T細胞。近年來，慢病毒轉導技術已經成功應用於CAR-T細胞的製備。

隨著AAV和LVV相關載藥技術的不斷進步，其相關製劑的不溶性微粒檢查也受到越來越多的關注，特別是基於AAV和LVV載藥技術的眼用注射液。眼用注射液作為眼用製劑的重要方麵，其不溶性微粒檢查主要是參照USP789 眼用溶液的標準。

USP789關於不溶性微粒的檢查規定了兩種方法，第一種是光阻法，第二種是顯微計數法，但是兩種方法的判定標準是一致的，具體詳見下圖：

本文將通過一款特殊的LVV眼用注射液對比兩種方法的一個差別：

樣品信息如下：

光阻法-不溶性微粒測試結果如下圖所示：

由上圖可以看出，大於等於10μm以上的微粒為929.67個/ml，大於等於25μm以上的微粒為40.67個/ml，大於等於50μm以上的微粒為0個/ml，根據USP789光阻法判定標準，判定樣品不符合檢查的規定。

顯微計數法-不溶性微粒測試結果如下圖所示：

由上圖可以看出，大於等於10μm以上的微粒為9個/ml，大於等於25μm以上的微粒為3個/ml，大於等於50μm以上的微粒為2個/ml，根據USP789顯微計數法判定標準，判定樣品符合檢查的規定。

結論：

兩種不同的方法，測試結果確實有非常大的差別，主要原因是：

1 一般眼用注射液相關製劑裝量都比較少，要滿足光阻法的檢查一般需要混合多支進行檢查，或者進行稀釋進行檢查，無論哪種方法，在製樣的過程中容易產生氣泡，加上體係本身少量的矽油會被當成微粒，造成很多假性的結果，因此導致樣品測試結果不合格；

2 顯微計數法跟光阻法相比，是整支全部進行檢查，不需要考慮裝量的影響，製備樣品的過程中，同時可以去除氣泡和矽油等的影響，反映體係真實的不溶性微粒結果；同時可以通過觀察不溶性微粒的形貌去溯源不溶性微粒的來源，改善產品工藝，提高產品質量。

下圖為LVV眼用製劑中的一些特征不溶性微粒圖片：

檢查儀器如下圖所示：

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